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Diagnóstico laboratorial de candidemia em pacientes de unidades de cuidados intensivos: desempenho dos métodos de PCR em tempo real, detecção de (1,3)--D- glucana e MALDI-TOF

Felix, Gabriel Naves

Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP; Universidade de São Paulo; Faculdade de Medicina 2023-03-27

Acesso online. A biblioteca também possui exemplares impressos.

  • Título:
    Diagnóstico laboratorial de candidemia em pacientes de unidades de cuidados intensivos: desempenho dos métodos de PCR em tempo real, detecção de (1,3)--D- glucana e MALDI-TOF
  • Autor: Felix, Gabriel Naves
  • Orientador: Negro, Gilda Maria Barbaro Del
  • Assuntos: Biologia Molecular; Reação Em Cadeia Da Polimerase Em Tempo Real; Micologia; Hemocultura; Glucana 1; 3-Beta-Glucosidase; Candidemia; Candida Spp; Glucan 1; Molecular Biology; Mycology; Blood Culture; Real-Time Polymerase Chain Reaction
  • Notas: Tese (Doutorado)
  • Descrição: As infecções sistêmicas causadas por Candida spp. representam importante causa de morbidade e mortalidade em pacientes internados em unidades de cuidados intensivos (UCI). Apesar da importância crescente desta levedura como agente etiológico de infecções graves em condições clínicas críticas, o desempenho dos métodos para diagnóstico precoce ainda permanece um desafio na prática médica. As hemoculturas, consideradas até hoje como padrão-ouro no diagnóstico dessas infecções, apresentam sensibilidade limitada e/ou demandam tempo prolongado para identificação das espécies infectantes. O emprego de técnicas moleculares, como a PCR em tempo real (qPCR) para a detecção de Candida diretamente em amostras clínicas, bem como a detecção de (1,3)- -D-glucana (BDG), tem sido relatado em diversas publicações, demonstrando resultados promissores. No entanto, a falta de padronização do método e de sua validação clínica, têm dificultado sua aplicação em laboratórios de rotina diagnóstica. Por outro lado, a técnica de espectrometria de massa do tipo MALDI-TOF possui elevada acurácia para identificação de micro-organismos e esta tecnologia tem sido empregada para detectar e identificar espécies de Candida diretamente em balões de hemocultura positivos, permitindo resultados em menor tempo e com menor custo. Este estudo teve como finalidade avaliar a acurácia de um ensaio qPCR para a detecção e identificação de cinco espécies de Candida, diretamente em amostras sanguíneas de 78 pacientes com hipótese diagnóstica de candidemia, atendidos em UCIs de três hospitais públicos da cidade de São Paulo. Foram também avaliados o ensaio para detecção de BDG em amostras séricas destes pacientes, e a técnica de MALDI-TOF para identificação das espécies de Candida. Os resultados mostraram que a identificação das espécies de Candida por MALDI-TOF foi concordante com as espécies isoladas das hemoculturas positivas em 90% dos casos, e obtida em 2-3 horas após a sinalização de positividade dos balões. Em relação à qPCR e ensaio de BDG, foi observado bom desempenho de ambos os ensaios nos 20 casos de candidemia comprovada pelas hemoculturas positivas, com positividade de 100% e 95%, respectivamente. A técnica molecular mostrou concordância de 100% com as culturas na identificação das espécies e, em quatro amostras desses pacientes (20%), foi detectada mais uma espécie de Candida além da isolada nas hemoculturas. Neste grupo, os valores de Cq variaram de17,8 a 35,8, e a mediana dos valores de BDG foi de 478,1 pg/mL. Nos casos de candidemia provável [44 pacientes com hemoculturas negativas, mas com sangue de cateter positivo para Candida (em 32 pacientes) e em outros sitios do organismo (em12 pacientes)], a qPCR detectou espécies de Candida em 14% dos casos nas amostras de sangue periférico. Nestas seis amostras, os valores de Cq variaram de 17,8 a 33,7, enquanto a mediana dos valores de BDG foi de 457,0 pg/mL. Nas demais amostras do grupo (26), a mediana dos valores de BDG foi de 131,2 pg/ml. Nos casos de candidemia possível (14 pacientes com suspeita clínica de candidemia, mas com todas as culturas para Candida negativas), a qPCR foi negativa em 100% e a BDG foi detectada em um caso; a mediana dos valores neste grupo foi de 62,5 pg/ml. Até onde vai nosso conhecimento, este é o primeiro estudo realizado no Brasil empregando estes ensaios em amostras de sangue de pacientes adultos mantidos em UCIs. Os resultados demonstraram que a técnica de qPCR permitiu a detecção das cinco espécies de Candida nos episódios de candidemia comprovada, além de detectar infecção pelo agente em seis casos prováveis, com resultados corroborados pela ensaio de BDG. Por outro lado, apesar do pequeno número de amostras analisadas, a negatividade da qPCR no grupo de candidemia possível, demonstra potencial valor preditivo negativo do ensaio, o que permitiria a suspensão de terapia antifúngica empírica em pacientes com menor risco de infecção. Também ficou demonstrado que o uso simultâneo dos ensaios molecular e de detecção de BDG pode contribuir para melhorar a acurácia do diagnóstico laboratorial não baseado em culturas para pacientes com risco para infecção por Candida. Entretanto, devido ao seu elevado custo, o ensaio de BDG não é disponível para a rotina diagnóstica laboratorial de centros médicos públicos ou privados no Brasil
  • DOI: 10.11606/T.5.2023.tde-16062023-113452
  • Editor: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP; Universidade de São Paulo; Faculdade de Medicina
  • Data de criação/publicação: 2023-03-27
  • Formato: Adobe PDF
  • Idioma: Português
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