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Construcao e uso de sondas de acidos nucleicos para a deteccao e diagnose do virus do anel do pimentao (vap)

Mario Lucio Lopes Darcy Martins da Silva

1995

Localização: CENA - Cent. En. Nuclear na Agricultura    ((043) L864c 9340 )(Acessar)

  • Título:
    Construcao e uso de sondas de acidos nucleicos para a deteccao e diagnose do virus do anel do pimentao (vap)
  • Autor: Mario Lucio Lopes
  • Darcy Martins da Silva
  • Assuntos: HORTICULTURA; ESTRUTURA MOLECULAR (QUÍMICA TEÓRICA)
  • Notas: Dissertação (Mestrado)
  • Descrição: O RNA de fita simples obtido das partículas purificadas do VAP e, formas replicativas isoladas através da cromatografia com celulose CF-11, foram utilizadas como sondas para a detecção do vírus. A construção das sondas foi realizada em quatro etapas distintas que compreenderam a eletroforese e eluição do RNA viral a partir dos géis de agarose, hidrólise alcalina parcial, preparo dos marcadores e marcação com fotobiotina ou citocromo C biotinilado. As reações de hibridização sobre as membranas foram visualizadas com o conjugado avidina-fosfatase alcalina, através da formação de precipitados colorimétricos. Os quatro critérios considerados na escolha da estratégia de marcação foram, o limite de detecção, a especificidade das sondas, reação de fundo e facilidade de execução. Os dois métodos avaliados não apresentaram grandes diferenças quanto à especificidade e reação de fundo mas apesar da maior facilidade de marcação das sondas com citocromo C biotinilado, a marcação direta com fotobiotina foi preferida por ter alcançado um limite de detecção maior. As sondas de RNA possibilitaram a detecção do VAP em reação de "Dot Blot", "Northen Blot" e nas impressões de tecidos vegetais sobre membranas de nitrocelulose
  • Data de criação/publicação: 1995
  • Formato: 113p.
  • Idioma: Português
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