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Mecanismo de ação e regulação de uma fosfotase alcalina no processo de ossificação endocondrial efeito colagenase nas propriedades da fosfotase alcalina

Rúbia Regina Gonçalves Francisco de Assis Leone

2000

Localização: FMRP - Fac. Medicina de Ribeirão Preto    (Gonçalves, Rúbia Regina )(Acessar)

  • Título:
    Mecanismo de ação e regulação de uma fosfotase alcalina no processo de ossificação endocondrial efeito colagenase nas propriedades da fosfotase alcalina
  • Autor: Rúbia Regina Gonçalves
  • Francisco de Assis Leone
  • Assuntos: BIOQUÍMICA
  • Notas: Dissertação (Mestrado)
  • Descrição: Colagenase bruta é muito empregada na extração da fosfatase alcalina de cartilagem e/ou osso e, aparentemente seria a responsável por algumas alterações cinéticas apresentadas pela enzima de cartilagem e/ou osso. O objetivo desse trabalho é tentar esclarecer se o tratamento com colagenase provoca alterações nas propriedades cinéticas da fosfatase alcalina de osso. Uma das alterações observadas quando a placa óssea foi tratada com colagenase, foi o desaparecimento de uma fração solúvel que geralmente aparece na cromatografia em coluna de Sepharose 4B. Além disso, a fosfatase alcalina de placa óssea é mais instável, perdendo cerca de 30% de sua atividade após trinta dias. O tratamento da placa óssea com colagenase acarretou o deslocamento do pH ótimo de hidrólise do PNFF para valores mais alcalinos (pH= 10,25). Bem como afetou a atividade específica da enzima. A hidrólise do PNFF, ocorreu através de uma cinética Michaeliana com V= 1606,3 U/mg e Km=322'mu'M. Embora a atividade da enzima tenha aumentado cerca de 5 vezes, a afinidade pelo substrato aumentou cerca de oito vezes. O tratamento da placa óssea com colagenase também provocou alterações nos efeitos observados para os íonsmetálicos. A estimulação da atividade PNFFase pelos íons magnésio (Ko.5= 7.9 'mu'M) foi da ordem de 60%, o dobro do observado para os controles. Os íons zinco, inibidores não-competitivos da fosfatase alcalina, apresentaram dois efeitos distintos, um estimulador (Ko.s= 0.2
    'mu'M) e um efeito inibidor acima de 1 'mu'M. Os íons cobalto estimularam a atividade PNFFase da enzima com Ko.5= 5.3 'mu'M enquanto os íons manganês, com Ko.5= 0.7 'mu'M. Os íons cálcio não apresentaram nenhum efeito sobre a atividade PNFFase da enzima de placa óssea tratada com colagenase, em contraste com o efeito inibidor relatado para a enzima obtida de placas sem tratamento com colagenase. A fosfatase alcalina de placa óssea tratada com colagenase apresentou uma ) maior instabilidade térmica tanto para a hidrólise do PNFF ('delta'H=71,6 kcal/mol) quanto para a do ATP ('delta'H= 41,0 kcal/mol) quando comparada com amostras não tratadas com colagenase. A hidrólise do ATP pela fosfatase alcalina de placa tratada com colagenase apresentou resultados similares aos relatados para a enzima obtida sem tratamento com colagenase. Entretanto, em concentrações crescentes de íons cálcio (V= 700,2 U/mg e Ko.5= 0.5 mM) e magnésio (V= 580,1 U/mg; Ko.5= 0.7 mM), apenas uma única família de sítios foi revelada, em contraste com os controles, que apresentaram duas. Também para o pirofosfato, o pH ótimo de hidrólise pela enzima foi deslocado para valores maiores (pH= 9,0) e, a cinética de hidrólise do substrato revelou apenas uma única família de sítios (Ko.5= 1.5 g.M) em contraste com os dois sítios relatados para a enzima obtida de placas não tratadas com colagenase. Além disso, a teofilina não inibiu completamente a enzima. Os efeitos dos íons magnésio sobre a
    atividade pirofosfatase da fosfatase alcalina de placa óssea tratada com colagenase também foram alterados. A única família de sítios apresentou um Ko.5= .1.0'mu'M. Os resultados deste trabalho indicam fortemente que o tratamento com colagenase é responsável pelas alterações observadas nas propriedades cinéticas da fosfatase alcalina de placa óssea
  • Data de criação/publicação: 2000
  • Formato: 85 p.
  • Idioma: Português
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