Caracterização funcional da região repressora proximal do promotor do gene de pufe de DNA BhC4-1

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Caracterização funcional da região repressora proximal do promotor do gene de pufe de DNA BhC4-1
Autor: Marcos de Campos Neves
Nadia Monesi
Assuntos: DROSOPHILA; EXPRESSÃO GÊNICA; GENÉTICA MOLECULAR
Notas: Dissertação (Mestrado)
Descrição: Os pufes de DNA de Sciaridae são formados nos cromossomos politênicos da glândula salivar durante o último estádio larval e constituem regiões do genoma onde ocorrem amplificação gênica (resultado de eventos de re-iniciação da replicação) e expressão gênica de modo regulado no desenvolvimento. Nosso laboratório utiliza como modelo de estudo o gene BhC4-1 do pufe de DNA C4 do sciarídeo Bradysia hygida, expresso e amplificado na glândula salivar no final do quarto estádio larval, em resposta ao aumento dos níveis de ecdisona que promovem a metamorfose. Dados mais recentes indicam que no final do quarto estádio larval a amplificação e expressão de BhC4-1 são também verificadas em menores níveis na glândula protorácica, órgão larval responsável pela síntese de ecdisteróides. A caracterização funcional da região promotora de BhC4-1 está sendo realizada no sistema modelo Drosophila melanogaster. Os dados obtidos no sistema heterólogo revelaram que os mecanismos controladores da expressão de BhC4-1 em glândulas salivares de prépupas são conservados em Drosophila. A caracterização funcional da região promotora de BhC4-1 resultou também na identificação de elementos cis- reguladores que regulam a expressão do gene na glândula anelar. A glândula anelar é o principal órgão endócrino larval de Drosophila e é resultado da fusão das glândulas protorácicas, do corpus allatum e do corpus cardiacum. Um elemento cis-regulador identificado constitui o ativador de
glândula anelar de 67 pb (-253-187), capaz de promover a expressão do gene BhC4-1 na glândula anelar a partir do fmal do desenvolvimento embrionário. Além disso, foram identificadas duas regiões repressoras (-1293/-254) e (-3314/-1294), que reprimem o início da expressão do gene na glândula anelar em tempos anteriores ao segundo estádio larval e prépupas O hora, respectivamente. O presente trabalho teve como objetivo estender a caracterização funcional da região repressora proximal (-1293/-254). Para tanto, foram obtidas linhagens transformadas com duas construções distintas, (-824/-187) e (-488/-187). As construções (-824/-187) e (-488/-187) apresentam a seguinte estrutura: elemento PI gene de seleção white / (-824/-187) ou (-488/-187) do promotor de BhC4-1/promotor basal de Fbp1/ gene repórter lacZ/ elemento P. A análise do padrão de expressão da proteína repórter 'beta'-galactosidase nos transformantes revelou que a expressão de BhC4-1-1acZ é inicialmente detectada na glândula anelar de larvas de segundo estádio, continua a ser detectada durante o terceiro estádio larval e o estágio de prépupa e não é mais detectável em pupas 24 horas. Além disso, em embriões e larvas de primeiro estádio foi detectado um padrão de expressão ectópico da proteína repórter, aparentemente localizado na epiderme. Resultados anteriores sugeriam que os repressores da expressão de BhC4-1 na glândula anelar em tempos anteriores ao segundo estádio estão
contidos no fragmento (-370/- 253). Uma vez que ambas as construções testadas contêm na extremidade 5' o fragmento (-370/-254) e na extremidade 3' o ativador de glândula anelar (-253/-187), os resultados obtidos revelam que a presença destes dois módulos cis-reguladores (repressor + ativador), quando testados à montante de um promotor basal heterólogo, é suficiente para regular a expressão de BhC4-1 na glândula anelar a partir do segundo estádio larval. No conjunto, os dados obtidos contribuem para estender a caracterização da região repressora proximal (-1293/-254) do promotor do gene de pufe de DNA BhC4-1. Mais ainda, uma vez que a caracterização de mecanismos reguladores da transcrição na glândula anelar encontra-se em um estágio inicial, a identificação de elementos repressores que atuam neste tecido deverá, a longo prazo, contribuir também para o entendimento dos mecanismos que regulam a expressão de genes de Drosophila expressos no principal órgão endócrino larval
Data de criação/publicação: 2009
Formato: 69 p.
Idioma: Português

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Caracterização funcional da região repressora proximal do promotor do gene de pufe de DNA BhC4-1

Marcos de Campos Neves Nadia Monesi

2009

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