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Ferro lábil: propriedades fundamentais e reatividade com peroxinitrito no modelo celular RAW 264.7

Condeles, André Luís

Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP; Universidade de São Paulo; Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto 2023-05-25

Acesso online. A biblioteca também possui exemplares impressos.

  • Título:
    Ferro lábil: propriedades fundamentais e reatividade com peroxinitrito no modelo celular RAW 264.7
  • Autor: Condeles, André Luís
  • Orientador: Toledo Junior, José Carlos
  • Assuntos: Cinética; Ferro Lábil; Peroxinitrito; Propriedades Termodinâmicas; Kinetics; Labile Iron Pool; Peroxinitrite; Thermodynamic Properties
  • Notas: Tese (Doutorado)
  • Descrição: O Ferro Lábil (LIP) representa uma fonte celular universal, regulável e fundamental de ferro (II) usada para incorporação como o cofator de apo-ferro proteínas nascentes. Apesar dessa alegada função de chaperona de ferro, a identidade de LIP ainda é desconhecida, sendo sua existência baseada na propriedade de ser complexado por quelantes de elevada afinidade por Fe(II), o que distingue LIP do ferro ligado a grupos heme e clusteres de enxofre. Essa propriedade também tem sido explorada para estudar suas reações químicas e propriedades biológicas. Recentemente, em investigações da oxidação dependente de peroxinitrito em células RAW 264.7, observamos que a quelação de LIP aumenta a oxidação de um indicador fluorescente e concluímos que LIP interage com peroxinitrito (ou derivados radicalares de peroxinitrito) e diminui seu poder oxidante. O presente estudo é dividido em dois capítulos. No primeiro, nós abordamos propriedades fundamentais da reação entre LIP e peroxinitrito usando a mesma metodologia de fluorescência e modelo celular e constatamos que a reação entre LIP e peroxinitritro é provavelmente direta, rápida (constante de velocidade na faixa entre 106-107 M-1s-1) e com características catalíticas. Reunidas, essas informações sugerem que LIP representa um sistema peroxinitrito redutase em células RAW 264.7. No segundo capítulo, nós criamos um modelo de que LIP esteja ligado a um constituinte celular C na forma de um complexo genérico CLIP e modificamos metodologia originalmente usada para quantificação de LIP para acessar a constante termodinâmica de afinidade entre LIP e C (Kd) bem como a concentração total de C. Os resultados sugerem que as concentrações totais de LIP e de seu ligante (C) não ultrapassem 3 µM em células RAW 264.7 e que estejam ligados fortemente (Kd ≈ 10-2 µM), existindo predominantemente como CLIP. Essas informações confrontam as hipóteses existentes de que LIP seja o complexo hexaaqua Fe(II) ou um complexo com Glutationa (GSFe) e podem ajudar na identificação de LIP.
  • DOI: 10.11606/T.59.2023.tde-14072023-153350
  • Editor: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP; Universidade de São Paulo; Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto
  • Data de criação/publicação: 2023-05-25
  • Formato: Adobe PDF
  • Idioma: Português
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  • Realização: ABCD-USP USP   Logos de Redes Sociais: Freepik

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