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Estudo da expressão de genes envolvidos em estresse oxidativo no mutante Rho de Caulobacter crescentus

V. C. S. Italiani Marilis do Valle Marques; Congresso Brasileiro de microbiologia (22. 2003 Florianópolis)

Sociedade Brasileira de Microbiologia, 2003

Sociedade Brasileira de Microbiologia 2003

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  • Título:
    Estudo da expressão de genes envolvidos em estresse oxidativo no mutante Rho de Caulobacter crescentus
  • Autor: V. C. S. Italiani
  • Marilis do Valle Marques; Congresso Brasileiro de microbiologia (22. 2003 Florianópolis)
  • Assuntos: MICROBIOLOGIA
  • É parte de: Sociedade Brasileira de Microbiologia, 2003
  • Notas: Disponível em CD-Rom
  • Descrição: Caulobacter crescentus é uma bactéria Gram-negativa aquática e portanto precisa se adaptar às várias condições de estresse impostas pela natureza, alterando todo o seu programa de expressão gênica. A terminação de transcrição em bactérias representa um importante caminho na regulação desta expressão. O fator Rho catalisa a terminação de transcrição, dependente de ATP, ligando-se ao mRNA nascente e liberando o mesmo da RNA polimerase devido a sua função de RNA-DNA helicase. Um trabalho anterior de nosso laboratório permitiu o isolamento de uma linhagem de Caulobacter (SP3710) na qual o gene rho está interrompido pela inserção do transposon Tn5, e que mostrou um fenótipo de alta sensibilidade a estresses, especialmente estresse oxidativo. Neste trabalho foi feita uma tentativa de obtenção de um mutante nulo para o gene rho. Inicialmente um fragmento contendo o gene rho completo e parte de suas regiões flanqueadoras foi amplificado por PCR e clonado no vetor pNPTS138. Em seguida grande parte da região codificadora de rho foi deletada e o vetor foi recircularizado ou esta região foi substituída pelo cassete de resistência a espectinomicina. Estes plasmídeos foram introduzidos em Caulobacter por conjugação, onde o pNPTS138 se integrou por recombinação homóloga na cópia do gene cromossomal correspondente. Em um segundo evento de recombinação, o plasmídeo foi deletado do cromossomo, carregando a cópia íntegra do gene e deixando a cópia deletada ou interrompida.
    Como a célula se mostrou inviável após a segunda recombinação, foi necessário a complementação com uma cópia do gene rho presente em outro plasmídeo, com replicação autônoma, transferido para a célula entre os dois eventos de recombinação. Os passos das recombinações foram monitorados por “Southern Blot”. Estes resultados indicam que o gene rho é essencial para Caulobacter e que a linhagem contendo o Tn5 deve ter alguma atividade residual de Rho. Também foi feita a identificação do início de transcrição do gene rho de Caulobacter por ensaio de extensão de oligonucleotídeo e analisamos o papel de Rho na expressão dos genes katG e ahpC, envolvidos na resposta a estresse oxidativo, por ensaio de RT-PCR semi-quantitativo. Os resultados obtidos mostram uma alteração nos níveis do mRNA de katG na linhagem SP3710
  • Editor: Sociedade Brasileira de Microbiologia
  • Data de criação/publicação: 2003
  • Formato: res. MAM 076.
  • Idioma: Português
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