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O papel do HNF4α na morte das células beta pancreáticas induzida por citocinas pró-inflamatórias

Angelo Gustavo Di Stefano Fernanda Ortis

2020

Localização: ICB - Inst. Ciências Biomédicas    (T-ICB BMC QH581 S816ph 2020 )(Acessar)

  • Título:
    O papel do HNF4α na morte das células beta pancreáticas induzida por citocinas pró-inflamatórias
  • Autor: Angelo Gustavo Di Stefano
  • Fernanda Ortis
  • Assuntos: DIABETES MELLITUS; CÉLULAS MORTAS; CITOCINAS; INSULINA -- SECREÇÃO -- REGULAÇÃO -- DEFICIÊNCIA; HOMEOSTASE; GLICOSE -- TOLERÂNCIA -- METABOLISMO; ILHOTAS DE LANGERHANS; Cell Death; Célula Beta Pancreática; Diabetes Mellitus; Hepato-Cyte Nuclear Factor 4 Alpha; Hepatocyte Nuclear Factor 4 Alpha; Morte Celular; Pancreatic Beta Cell
  • Notas: Dissertação (Mestrado)
  • Descrição: O diabetes mellitus tipo 1 (DM1) é uma doença autoimune que causa a disfunção e a destruição das células β pancreáticas, produtoras de insulina, ao induzir vias pró-apo-ptóticas, como o estresse de retículo endoplasmático (RE), devido a exposição dessas células à citocinas pró-inflamatórias. O Mature-onset diabetes of the youth type 1 (MODY1) é um tipo de DM causado por mutações no gene Hepatocyte nuclear factor 4 alpha (HNF4 α), levando a deficiência na secreção de insulina. Além de outras diversas funções na diferenciação e da sobrevivência das células Β, esse gene também é importante para a manutenção da homeostase do RE, sugerindo que o papel do HNF4 α na regulação da secreção de insulina poderia estar relacionado a viabilidade das células Β frente a exposição à citocinas pró-inflamatórias. Sendo assim, o estudo visou avaliar o papel desse gene na disfunção e morte de células Β após exposição destas às citocinas pró-inflamatórias. Foi realizado o silenciamento do HNF4 α em células de insulinoma de rato (INS-1E) com siRNA seguido de tratamento com citocinas pró-inflamatórias (IL-1 Β + IFN- + TNF) ou tapsigargina (indutor de estresse de RE) para avaliação da ativação da Caspase-3 e das proteínas de estresse de RE (p-eIF2 α , p-IRE1 e XBP1s) por western blot. Para avaliar o efeito do HNFα5 no metabolismo da glicose, foi realizado o Teste de Tolerância a Glicose (GTT) em camundongos da linhagem InsCRE.HNF4 α loxP/loxP, após a ndução do knockout.
    Em seguida, foi avaliado por western blot a expressão de Caspase-3 nas ilhotas dos camundongos knockout após exposição aos mesmos tratamentos que as células INS-1E. Também foi avaliada a expressão de insulina e glucagon nessas ilhotas através de imunohistoquímica. A redução da expressão do HNF4 α protegeu contra morte por apoptose, pois diminui a expressão de Caspase-3 ativada nas células INS-1E e nas ilhotas knockout. Além disso, houve a redução da expressão das proteínas relacionadas ao estresse de RE nas células INS-1E. Animais HNF4 α knockout apresentam tolerância diminuída a glicose. As ilhotas knockout apresentaram significativa redução na marcação de insulina. Como um todo, esses resultados mostram que o HNF4 α parece ter uma participação 11 deletéria em células Β expostas à citocinas pró-inflamatórias, porém exerce um importante papel na função fisiológica dessas células. Frente a esses resultados, sugere-se um importante papel do HNF4 α na manutenção do estado diferenciado das células Β, pois, devido à perda desse estado diferenciado, pela redução da expressão desse fator de transcrição, essas células param de responder às citocinas pró-inflamatórias como esperado de uma célula Β normal. Sendo assim, um melhor entendimento das vias reguladas pelo HNF4 α em células Β é de extrema importância para o desenvolvimento de terapias de prevenção da função e viabilidade dessas células
  • Data de criação/publicação: 2020
  • Formato: 59 p.
  • Idioma: Português
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