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Establishment of porcine cell lines producing a murine recombinant retrovirus in order to transfer the nlslacZ gene into porcine cells

Charreau, B ; Grépinet, O ; Delouis, C ; Nandi, P.K

Research in virology (Paris), 1991, Vol.142 (5), p.343-351

Paris: Elsevier B.V

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  • Título:
    Establishment of porcine cell lines producing a murine recombinant retrovirus in order to transfer the nlslacZ gene into porcine cells
  • Autor: Charreau, B ; Grépinet, O ; Delouis, C ; Nandi, P.K
  • Assuntos: Animals ; Biological and medical sciences ; Biotechnology ; Cats ; Cattle ; Cell Line ; Cell Separation ; Cloning, Molecular ; Endothelium ; Fundamental and applied biological sciences. Psychology ; Genetic engineering ; Genetic technics ; Genetic Vectors ; Goats ; Horses ; Lac Operon ; Life Sciences ; Lymphocytes ; Male ; Methods. Procedures. Technologies ; Mice ; Molecular cloning ; Moloney murine leukemia virus - genetics ; nlslacZ gene ; Porcine cells ; Pseudotype xénotropique, Cellules porcines ; Rabbits ; Recombination ; Recombination, Genetic ; Retroviridae - genetics ; Retroviridae - growth & development ; Retroviridae Infections - genetics ; Retrovirus ; Rétrovirus, Recombinaison, Génie génétique, Gène nlslacZ ; Sheep ; Swine ; Testis ; Transfection ; Virus Integration - genetics ; Virus Replication ; Xenotropic pseudotype
  • É parte de: Research in virology (Paris), 1991, Vol.142 (5), p.343-351
  • Notas: ObjectType-Article-2
    SourceType-Scholarly Journals-1
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    content type line 23
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  • Descrição: Swine testis (ST) cell lines producing a murine recombinant retrovirus (RRV) were established in order to transfer the bacterial lacZ gene fused to a nuclear location signal ( nlslacZ) into animal cells. ST cells were infected with the supernatant of the cat G355.5LacZ2 cell line which produces amphotrophic and xenotropic MMuLVSVnlslacZ-defective RRV and wild amphotropic and xenotropic MMuLV. Expression of the nlslacZ reporter gene was under the transcriptional control of both the SV40 early promoter and the retroviral LTR. ST cells expressing the reporter gene were sorted and cloned by limiting dilutions. Fourteen STLacZ-cell lines were isolated and subsequently tested for virus production. Depending on the host range of the retroviruses, two cell lines (STBF11 and STAA3) produced both a xenotropic recombinant pseudotype and wild retroviruses; another (STAB10) produced both an amphotopic recombinant pseudotype ans wild retroviruses. Southern blot analysis of the producer cell lines was carried out to verify proviral integration. The efficiency of the different pseudotypes in the transfer of the nlslacZ reporter gene to cultured animal cells, including porcine cells, was compared to the pseudotyped RRV produced by cat cell lines. Our results showed that the xenotropic RRV produced by the porcine STBF11 cell line has a high titre for cells from different species and led to a higher number of porcine endothelial and lymphoblastoid cells expressing the reporter gene than did RRV produced by the cat packaging cell lines. Des lignées cellulaires porcines qui produisent un rétrovirus recombinant murin, capable de transférer efficacement le gène bactérien modifié nlslacZ (nls pour nuclear location signal) dans des cellules procines en culture, ont été établies. La lignée cellulaire ⪡swine testis⪢ (ST) a été infectée avec le surnageant de culture de la lignée cellulaire de chat G355.5LacZ2. Cette lignée produit à la fois des rétrovirus recombinants amphotropique et xénotropique MMuLVSVnlslacZ et des virus MMuLV sauvages amphotropique et xénotropique. L'expression du gène marqueur nlslacZ est sous le contrôle transcriptionnel du promoteur précoce du SV40 et du LTR (long terminal repeat) du rétrovirus. Les cellules STLacZ exprimant le gène marqueur ont été sélectionnées par cytofluorimétrie puis clonées par dilution limite. La production de rétrovirus de rétrovirus recombinants et sauvages a été testée pour les 14 lignées cellulaires STLacZ isolées. D'aprés le spectre d'hôte des rétrovirus produits, deux lignées (STAA3 et STBF11) produisent un mélange de rétrovirus xénotropriques recombinant et sauvage, et une troisième (STAB10) produit un mélange de rétrovirus amphotropiques recombinant et sauvage. L'intégration des provirus dans les lignées STLacZ productrices a été confirmée par hybridation moléculaire selon la technique de Souther. L'efficacité des différents pseudotypes pour le transfert du gène marqueur dans les cellules animales, et en particulier dans les cellules porcines, a été comparée à celle des rétrovirus recombinants produits par les lignées cellulaires de chat. Nos résultats montrent que le rétrovirus recombinant produit par la lignée porcine STBF11 a un titre élevé pour des cellules de différentes espèces et, de plus, permet d'obtenir un plus grand nombre de cellules porcines endothéliales et lymphoblastoïdes exprimant le gène marquer que celui permis par les rétrovirus recombinants produits par les lignées félines.
  • Editor: Paris: Elsevier B.V
  • Idioma: Inglês
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