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Hsp60 recombinante de Paracoccidioides brasiliensis reverte a proteção induzida por adjuvante na paracoccidioidomicose experimental

Fabrício Freitas Fernandes Admilson Panunto-Castelo

2013

Localização: FMRP - Fac. Medicina de Ribeirão Preto    (Fernandes, Fabrício Freitas )(Acessar)

  • Título:
    Hsp60 recombinante de Paracoccidioides brasiliensis reverte a proteção induzida por adjuvante na paracoccidioidomicose experimental
  • Autor: Fabrício Freitas Fernandes
  • Admilson Panunto-Castelo
  • Assuntos: PARACOCCIDIOIDES BRASILIENSIS; PARACOCCIDIOIDOMICOSE; IMUNOSSUPRESSÃO; APOPTOSE
  • Notas: Tese (Doutorado)
  • Descrição: A paracoccidioidomicose (PCM), causada pelo fungo Paracoccidioides brasiliensis, é uma micose sistêmica endémica da América Latina. Previamente, nosso grupo demonstrou que uma fiação ligante de fetuína (FBP), obtida de antígenos somáticos de P. brasiliensis por técnicas cromatográficas, era capaz de reverter o efeito benéfico de adjuvante completo de Freund (CFA), levando a um quadro de imunossupressão na PCM experimental murina. Neste estudo, identificou-se uma proteína de 60kDa (Hsp60) como responsável pela atividade supressora de FBP. Embora FBP apresentasse duas outras proteínas majoritárias de 55 e 50kDa, todas as três proteínas foram identificadas por espectrometria de massa e tiveram a mesma identidade (>96%), correspondente à proteína de choque térmico de 60kDa de P. brasiliensis. Após algumas análises in silico, o gene dessa proteína foi clonado no vetar pGEM-T e subclonado em pET28a e a proteína recombinante expressa em Escherichia coli cepa Rosetta. A rHsp60 foi purificada por cromatografia de afinidade em coluna de níquel HisTrap. Para avaliar o efeito de rHsp60 no modelo experimental de PCM, injetou-se rHsp60 emulsificada em CFA em animais infectados por 21 dias com P. brasiliensis. Tais animais apresentaram, 30 dias após o tratamento, carga fúngica e lesão tecidual significativamente mais elevadas que os animais controles tratados com CFA ou IFA. Além disso, rHsp60 aumentou os níveis dos transcritos de IL-17, IL-6, TNF-‘alfa’, TGF-‘beta’ e IFN-‘gama’ e diminuiu os de IL-10, sugerindo que rHsp60 induz um padrão de resposta imunológico Th17. Os ensaios in vitro, mostraram que rHsp60 apresenta a capacidade de induzir a morte de linfócitos em culturas de células do baço e do linfonodo de forma antígeno-inespecífica. Reiterando os fatos expostos, podemos dizer que rHsp60 induz uma resposta imunológica ineficiente em camundongos infectados com P.
    brasiliensis, com inflamação exacerbada, disseminação fúngica e morte dos linfócitos
  • Data de criação/publicação: 2013
  • Formato: 113 p anexos.
  • Idioma: Português
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