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A metodologia de geração de mutantes por transposição na identificação de genes de resposta a estresses ambientais

Marilis do Valle Marques E. A Lang; L. F. G Zuleta; V. C Italiani; V. S Braz; Congresso Brasileiro de microbiologia (22. 2003 Florianópolis)

Sociedade Brasileira de Microbiologia, 2003

Sociedade Brasileira de Microbiologia 2003

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  • Título:
    A metodologia de geração de mutantes por transposição na identificação de genes de resposta a estresses ambientais
  • Autor: Marilis do Valle Marques
  • E. A Lang; L. F. G Zuleta; V. C Italiani; V. S Braz; Congresso Brasileiro de microbiologia (22. 2003 Florianópolis)
  • Assuntos: MICROBIOLOGIA
  • É parte de: Sociedade Brasileira de Microbiologia, 2003
  • Notas: Disponível em CD-Rom
  • Descrição: A determinação da sequência completa de DNA do genoma de várias bactérias trouxe um grande impulso para o estudo de genes envolvidos na resposta a estresses. A análise funcional do genoma da bactéria aquática Caulobacter crescentus está sendo realizada através da varredura de bibliotecas de mutantes gerados por inserção aleatória de transposon. Duas bibliotecas foram construídas, uma com o transposon Tn5 (5000 clones) e outra com uma versão do Tn5 carregando um gene repórter lacZ (5700 clones). Os plasmídeos suicidas contendo os transposons foram inseridos em C. crescentus através de conjugação. As bibliotecas foram triadas para o isolamento de mutantes deficientes na resposta a NaCl 85 mM, CdCl2 30 mM, FeSO4 100 mM e congelamento (-70°C). Após sucessivas triagens, foram isolados 6 mutantes para NaCl, 11 mutantes para CdSO4, 14 mutantes para FeSO4, 8 para os dois metais, e 14 para -70°C. Clones cuja expressão do gene lacZ repórter foi induzida pela presença de metais também foram isolados, pela metodologia de “agar overlay”. A determinação do sítio de inserção do transposon em cada clone foi feita através de PCR reverso, do DNA genômico digerido com PstI. Os fragmentos de restrição foram circularizados e amplificados por PCR com primers que hibridizam no transposon. O sequenciamento permitiu a identificação de alguns destes genes interrompidos, importantes na adaptação a estresses
  • Editor: Sociedade Brasileira de Microbiologia
  • Data de criação/publicação: 2003
  • Formato: res. MAM 068.
  • Idioma: Português
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