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Pesquisa do padrão de Imprinting genômico em crianças concebidas por técnicas de reprodução assistida
Marcus Vinicius de Matos Gomes Ester Silveira Ramos
2007
Localização:
FMRP - Fac. Medicina de Ribeirão Preto
(Gomes, Marcus V. de Matos )
(Acessar)
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Título:
Pesquisa do padrão de Imprinting genômico em crianças concebidas por técnicas de reprodução assistida
Autor:
Marcus Vinicius de Matos Gomes
Ester Silveira Ramos
Assuntos:
REPRODUÇÃO
;
GENÉTICA MÉDICA
Notas:
Tese (Doutorado)
Descrição:
O imprinting genômico é um mecanismo regulado epigeneticamente, segundo o qual os genes se expressam de acordo com sua origem parental (paterna ou materna). Os mecanismos controladores do imprinting ainda não são completamente conhecidos, entretanto, a metilação diferencial do DNA é um importante fator e provavelmente o principal controlador. Experimentos em modelos animais revelaram uma vulnerabilidade dos genes regulados por imprinting aos procedimentos utilizados na reprodução assistida (TRA). Estudos epidemiológicos corroboram com esta hipótese ao relatarem aumento na incidência da síndrome de Beckwith-Wiedemann (SBW), uma doença congênita caracterizada por alterações do imprinting genômico, em crianças concebidas por TRA. Foram avaliados, no presente trabalho, o padrão de metilação de diferentes i I nucleotídeos citosinas (nt), seguidos de guaninas (CpGs), mapeados nas regiões controladoras de imprinting KvDMR (nt. 67.334, nt. 67.351, nt. 67.476, nt. 67.482, nt. 67.607 e nt. 67.631) e H19DMR (nt 1.313, nt.1.212, nt. 1.387 e nt. 1.500) pelos métodos de PCR específica para metilação (MS-PCR), digestão enzimática sensível à metilação associada à PCR em Tempo Real (DESM-RT), digestão enzimática sensível à metilação associada à PCR convencional (DESM-C) e reação combinada de bissulfito de sódio e restrição enzimática (COBRA) em 68 indivíduos, sendo 18 pacientes clinicamente normais concebidos por TRA, um paciente portador de SBW concebido por TRA, e 49
pacientes concebidos naturalmente, sendo 15 portadores de SBW, 10 portadores de hemihiperplasia isolada (HHI), 4 portadores de macrossomia sem diagnóstico clínico definido (MSDC) e 20 indivíduos hígidos (controles). Foi observada hipometilação nos nt. 67.334, nt. 67.351, nt. 67.476 e nt 67.482 da KvDMR em três pacientes concebidos por TRA, em três pacientes com SBW e em um com HHI, pelo método da MS-PCR. Padrão de metilação normal (monoalélico) foi observado nos irmãos gêmeos (dizigóticos) dos três pacientes concebidos por TRA que apresentaram hipometilação da KvDMR. Análise quantitativa da metilação pelo método DESM-RT revelou hipometilação nos nt. 67.607 e nt. 67.631 em todas as amostras, incluindo os controles. Hipermetilação nos nt.1.212, nt. 1.387 e nt. 1.500 da H19DMR foi observada em dois pacientes concebidos por TRA e em quatro indivíduos controles pelo método DESM-C embora tenha sido observado padrão normal de metilação no nt 1.313 pelo método COBRA. Os diferentes nts mapeados na KvDMR e na H19DMR podem apresentar padrão discordante de metilação. Pacientes concebidos por TRA clinicamente normais podem apresentar padrão de hipometilação da KvDMR similar ao padrão relatado exclusivamente em portadores de SBW ou HHI. Este resultado corrobora I com a hipótese de vulnerabilidade à TRA, porém também demonstra que esta alteração, isoladamente, não é capaz de causar o espectro clínico de SBW ou HHI, sugerindo que o mecanismo
etiológico destas doenças seja ainda mais complexo e envolva outras alterações moleculares. Gêmeos dizigóticos concebidos por TRA podem apresentar padrão discordante de metilação na região controladora do imprinting KvDMR. Hipermetilação nos nt.1.212, nt. 1.387 e nt. 1.500, adjacentes ao sexto sítio de ligação da CTCF na H19DMR, pode estar presente em células de cordão umbilical ou placenta de indivíduos controles clinicamente normais assim como em pacientes concebidos por TRA
Data de criação/publicação:
2007
Formato:
135 p. anexos.
Idioma:
Português
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